中文名：Pyrophosphatase, Inorganic （yeast）
英文名：Pyrophosphatase, Inorganic （yeast）
纯度：医药级，≥95%，0.1U/μl
货号：P489053
包装：100u
存储温度：-20°C储存
产品介绍：
产品描述
大体系体外转录mRNA 过程中，不可避免的会产生无机焦磷酸盐，这些物质对转录造成了极大的抑制作用，无机焦磷酸酶（ PPase ）可以水解核酸扩增实验中产生的无机焦磷酸盐，促进反应平衡向产物生成端平移，增加产物的量。
PPase（Pyrophosphatase, Inorganic，无机焦磷酸酶）的分子量约为 63kD，可催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐：P2O74_+H2O+PPase→2HPO42_。在核酸扩增实验中，PPase 可水解随着反应生成的无机焦磷酸盐，避免其对反应体系的抑制。焦磷酸盐的去除可使反应平衡向产物生成端平移。
本制品为利用大肠杆菌大规模发酵表达的 GMP 级重组无机焦磷酸酶（酵母来源），采用药用规格原辅料生产，并严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留等，符合 GMP 规范的产品生产与质量管理规程保障生产过程及所有原辅料可追溯。
质量要求
| 项目 |
标准 |
| 外观 |
澄明液体 |
| 可见异物 |
符合规定 |
| pH值 |
7.5±8.5 |
| 活性 |
98U/ml-102U/ml |
| 纯度 |
≥95% |
| 核酸内切酶残留 |
底物的降解不超过10% |
| 核酸外切酶残留 |
底物的降解不超过10% |
| RNA酶残留 |
底物的降解不超过10% |
| 细菌内毒素含量 |
≤10EU/ml |
| 外源性DNA残留 |
≤100pg/mg |
| 宿主蛋白质残留 |
≤50ppm |
| 支原体检测 |
阴性 |
| 重金属残留 |
≤10ppm |
|
遵循以下规范生产
1. ISO 9001:2015, certified facility。
2. 《GMP 附录-细胞治疗产品》国家药品监督管理局。
3. 《人用基因治疗总论-中国药典 2020》国家药典委。
4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products 用于细胞治疗，基因治疗和组织工程产品中的辅料。
5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 细胞治疗产品生产过程中细胞因子和生长因子。
6. Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products 用于生产细胞或基因治疗药物的生物来源原料。
产品特点
1. 水解无机焦磷酸盐 。
2. DNA合成：显著增强 DNA复制能力 。
3. RNA合成：体外转录反应中提高 RNA 产量 。
4. 最佳反应温度为25℃，65℃ 10min可使该酶失活。
产品用途
1. 优化 RNA转录：提高体外转录反应的 RNA产量 。
2. 去除利用焦磷酸盐测定法来进行 SNP基因分型的试剂中的 PPi污染物 。
3. 促进蛋白质、 RNA和 DNA的合成 。
4. 催化 PPi + H2O→2Pi的反应。
5. ssr-pcr optimization：Improve efficiency and increase DNA production.
活性定义
标准反应条件下每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐所需的酶量定义为 1 个活性单位。
保存体系
20 mM Tris-HCl; 100 mM NaCl; 1 mM DTT; 0.1 mM EDTA; 50% (v/v) Glycerol; pH 8.0。
保存温度
-20±5 ℃。
注意事项
1. 该酶在多种反应 Buffer 中均具有活性，通常该酶在 HDA、LAMP 等实验中，直接加入即可。
2. 该酶的用量在不同的实验中需要优化，通常在 0.05~1U/ml 浓度调整。
3. 该酶的最佳反应温度为 25℃，其在 16~37℃均有活性，65℃ 10min 可使该酶失活。
4. 辅因子：Mg2+对于酶发挥活性是必须的。
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