人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)ELISA试剂盒

人胸肾表达趋化因子(BRAK/CXCL14)elisa试剂盒优双抗体夹心法(检测未知抗原);
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
人胸肾表达趋化因子（BRAK/CXCL14）ELISA试剂盒kit说明书注意事项：
◆实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
◆酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
◆建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
◆若显色过浅，可适当延长底物温育时。
◆标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
◆冻结标本溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠混合，不要在混匀器上强烈震荡。
◆浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
◆反复冻融会使蛋白效价降低，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。