NCI-H460细胞：人大细胞肺癌细胞系

"NCI-H460细胞：人大细胞肺癌细胞系
细胞背景资料：该细胞１９８２年由A.F.Gazdar建系，源自一位患有大细胞肺癌的男性的胸腔积液。该细胞角蛋白、波形蛋白阳性。
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２传代
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
细胞生长特性：贴壁生长
解冻细胞出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下：１)冷冻时细胞密度过低：推荐的解决方案：缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后，立即将冻存管浸入在３７℃的水浴中，并震荡至全部融化，然后迅速地转移到预热的培养基中；２)不适当的冷冻过程：推荐的解决方案：解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术，并确保使用了适量和适合的冷冻液。出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下：１)培养瓶的大小：一般解决方案是一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中，使细胞密度上升；如，根据培养基的体积，从T７５培养瓶转移到２或３个T２５培养瓶中；２)细胞密度过低：通常解决方案是提高未来冷冻物种细胞的冻存密度，或使用较小的培养容器，或解冻多个试管来进行培养。
细胞培养更好经验详解：1)收到细胞，首先要镜检：观察细胞形态是否正常，对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好，观察细胞密度，有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化，很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样，主要是贴壁牢固问题。比如293T，平时贴壁就不是很牢，在装满的培养基瓶子里面，会发生大片的脱落，细胞聚集在一起，但是细胞生长还是正常的，通过离心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的贴壁生长。2)当通过上一步的观察，细胞初步没有问题时，进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时，则处理如下：弃除瓶中大部分培养基，仅保留5到10mL培养所需的常规培养基；或更换新鲜的培养基，置于培养箱中，随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下，会调整为静止期，或者慢速生长期，恢复37度的环境至少3个小时左右，才能重新调整到接近对数生长期的状态，在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率，和细胞的存活率。3)如果经步观察发现细胞密度超过90%，并且细胞状态很好时，则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快，状态稳定，不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶；对于生长较慢，细胞比较薄，状态容易波动的细胞类型，一次少传些，每瓶细胞密度大些，便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞，次处理也可以依照第二种情况。
常规的细胞实验(增殖，凋亡，迁移，分化之类的)，受消化影响不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。但少数实验，比如病毒包装，对细胞代数，对细胞状态要求极高。这个时候，胰酶消化，就是润洗，都会对细胞包装病毒的能力有影响，传代次数一多，细胞包装能力就会逐渐下降(当然也有其它因素影响包装效率)。这个时候都不用胰酶消化，用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。这些盐溶液通过影响ECM相关酶的活性，来使得细胞脱离基质附着表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。许多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白，trypsin切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca离子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者对付特别难消化的细胞，添加多一些EDTA，就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果１０min还消化不彻底的话)，而应该想其它办法；PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤，是常见的操作，因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。但这里面也有学问可以讲，对于一些难消化细胞，那么可以配制不含Ca，Mg离子的PBS，因为这些离子也会抑制trypsin的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞，不需要配制如此溶液。
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