药理作用
药理作用研究表明，亚甲蓝具有解毒作用、镇痛作用、抗菌作用、抗病毒作用、抗肿瘤作用并可纠正感染性休克患者的血流动力学紊乱。
颜色变化
亚甲蓝的水溶液在氧化性环境中呈蓝色，但遇锌、氨水等还原剂会被还原成无色形态，也是一种氧化还原指示剂。
用途
化学
分析化学中用亚甲蓝作为氧化还原反应滴定的指示剂，会比碘液更好。蓝瓶实验也是以亚甲蓝的变色为基础的。可以用来检验水的溶氧量，反应是会令亚甲蓝液更蓝。
染料
亚甲蓝可以给麻、丝绸、纸张染色。生物学上也被用做细菌或细胞染色剂（更容易观察细胞）。
医药
亚甲蓝因为有还原性，其注射液被用来治疗正铁血红蛋白血症。也用于解救硝基苯、亚硝酸盐和氰化物中毒等。
因为其杀菌消毒的作用，口服亚甲蓝或用其溶液冲洗可以治疗膀胱炎和尿道炎。另外，亚甲蓝在进入人体30分钟（注射）至几小时（口服）内会从尿中排出，导致尿液暂时呈蓝色，因此也用来作肾功能测定。
观赏鱼养殖中，0.1-0.2ppm的亚甲蓝溶液也被用作消毒，或治疗白点病等疾病。
0.3ppm的亚甲蓝溶液可以防止水霉菌的发生。
1ppm的亚甲蓝溶液用于一般体外虫的防治。
2ppm的亚甲蓝溶液用于体外虫的治疗。
合成方法
一种药用亚甲蓝的合成方法，其特征在于：用对氨基二甲基苯胺盐酸盐为起始原料，按照以下反应线路：
以摩尔质量比计算，称取对氨基二甲基苯胺盐酸盐2份，投入带温度计的反应釜中，加水溶解，搅拌下滴加浓硫酸0.41份，室温下依次加入氯化锌含量为4.95份的溶液、硫酸铝含量为1.00份的溶液、硫代硫酸钠含量为2.12份的溶液，并加入重铬酸钠含量为0.72份的溶液，搅拌下将反应液迅速加热至30～50℃，将N，N-二甲基苯胺含量为1.65份的盐酸溶液投入反应釜，随后立即加入重铬酸钠含量为1.45份的溶液，迅速加热到60～80℃，将2.87份二氧化锰投入反应釜，加热至80～90℃，维持温度反应20～40分钟，降温至40～60℃，搅拌下缓慢加入浓硫酸7.14份，搅匀后放出反应液，于4℃环境下放置4～6小时，析出沉淀，抽滤，滤饼用10％氯化钠水溶液洗涤，将滤饼转移至烧杯中，加入水，于电热套上搅拌加热至沸腾，趁热抽滤，滤液加入氯化锌1.84份和氯化钠25.64份，搅拌使溶解，再将该溶液于4℃环境下放置22～26h，抽滤，45～55℃干燥得亚甲基蓝氯化锌盐；
将所得氯化锌盐溶解于水中，加入碳酸钠0.52份，冷至室温，抽滤，少量水洗滤饼，加入氯化钠17.09份，搅拌溶解后于4℃环境下放置10～14小时，抽滤，滤饼于40-45℃干燥11～13小时得亚甲蓝粗品，然后用水重结晶数次即得。