牛磺鹅去氧胆酸的制备

2024/1/23 8:55:33

介绍

牛磺鹅去氧胆酸是酶法合成牛磺熊去氧胆酸的重要原料。胆汁酸(cholic acid)主要含有4种,分别为牛磺鹅去氧胆酸,牛磺胆酸,牛磺别胆酸和3α‑ 羟基‑7‑酮基胆烷酸。其中主要活性成分牛磺鹅去氧胆酸在家禽胆汁中的含量在 3‑4%之间[1]。

牛磺鹅去氧胆酸.jpg

牛磺鹅去氧胆酸

制备

以往制备方法的缺点

CN201210570131.4公开了一种鸡胆提取组合物及其提取方法,其中将牛磺鹅去氧胆酸与其他胆酸、氨基酸、蛋白质、脂肪等物质一起提取出。取鸡胆,冷冻,切碎,融化,压榨,过滤出胆汁,加入90‑98%的乙醇,室温搅拌,放置,沉淀蛋白,过滤,得上清液,加入石油醚进行萃取,收集乙醇层,浓缩蒸干,既得鸡胆提取组合物。提取过程虽然简单,但提取出的成分复杂,不能得到含量较高的的牛磺鹅去氧胆酸产品。

CN200610046652.4公开了一种用鸡胆提取鹅去氧胆酸的方法,取冻鸡胆切片,加热至70℃,加入所有胆汁总量10%氢氧化钠煮沸24小时,回流冷却,用盐酸调pH为2,得膏状物,用水洗至中性,加入胆膏2倍量的95%的乙醇和胆膏10%的硅藻土,回流后加入胆膏量10%的活性炭,回流,放冷后过滤,将滤液加入等量120#汽油脱脂,回流,静置,分离出的乙醇液并在反应釜中蒸干洗至中性,再加入2倍量95%的乙醇溶解后,加入蒸干药物量30%的氯化钡和蒸干药物量5%的活性炭,回流,热滤,将滤液浓缩出白色结晶物,洗净后加入10倍量水和10%倍量碳酸钠水溶液,加热回流,过滤,滤液调节至pH为2,将出现沉淀物干燥即得。该方法不仅步骤繁多,使用溶剂较多,成本高,收率低,且去掉牛磺酸的鹅去氧胆酸药效较差,后续通过化学法或者酶法合成熊去氧胆酸后,需要在体内经过酰胺化与牛磺酸结合后才能更有效的发挥生理作用。

取新鲜鸡胆汁500ml,加入3倍体积的乙醇提取,减压蒸干得鸡胆粉。将鸡胆粉用V(乙酸乙酯):V(无水乙醇)=8:2的混合液,以索氏提取器提取30次,冷却提取液得到浅黄色固体,过滤,沉淀用无水乙醇洗涤,置真空干燥器中干燥4h,用无水乙醇重结晶,得浅黄色TCDCANa结晶7.2g。文献采用薄层层析的方法报告TCDCANa含量在92%左右。该方法采用索氏抽提30次的方法,方法耗时长,操作复杂,损失较大,导致收率粗算只有50%左右,且产品含量低。

新制备方法

为了克服现有技术所存在的目标产物收率和纯度不理想等缺陷,赵士敏等人[2]提供一种从家禽胆汁中提取出高纯度,获得高收率的牛磺鹅去氧胆酸和牛磺胆酸的方法。具体步骤[2]如下:

步骤(1):

取鸡胆汁1kg,用破碎机破碎后,用纯水提取2次,提取时间均为1h,料液比分别为5,3倍,过滤,合并滤液,共8850ml,经检测提取液中牛磺鹅去氧胆酸浓度为4.09mg/ml,牛磺胆酸的浓度为2.63mg/ml。

步骤(2):

将提取液进行减压浓缩,得到浓缩液A,浓缩温度为65度,浓缩液A中牛磺鹅去氧胆酸的浓度为90.5mg/ml,牛磺胆酸的浓度为58.2mg/ml,浓缩液A的体积为400ml。

步骤(3):

(3‑A):将浓缩液A按照1:1的体积比加入乙酸乙酯400ml搅拌混合,然后用装有经修饰的超疏水海绵材料(上述记载的PU‑CNT‑PDA‑ODA)进行过滤 (水油分离),除掉乙酸乙酯层,得到除掉绝大部分油溶性杂质的水层溶液,共萃取1次,弃乙酸乙酯层。

(3‑B):将水层溶液调pH3.5,加入活性炭5g搅拌脱色1.5h,固液分离得到滤液,将滤液继续浓缩,得到浓缩液B,浓缩液B中牛磺鹅去氧胆酸的浓度为482.6mg/ml,牛磺胆酸的浓度为310.0mg/ml,浓缩液体积75ml。

步骤(4):

对改性C18反相硅胶(市售商品SILICYCLE 50μm)用甲醇浸泡处理,脱气后装柱,装柱量2400g硅胶,采用5%的甲醇水溶液洗涤2个柱体积。将浓缩液B加入少量甲醇溶解后,通过改性反相硅胶柱层析进行分离,采用梯度甲醇水溶液进行洗脱,梯度设置为5%甲醇水溶液(1倍柱体积),35%甲醇水溶液(3倍柱体积),40%甲醇水溶液(10倍柱体积),45%甲醇水溶液(7倍柱体积),流速10ml/min。其中35%甲醇水溶液洗脱得到含有牛磺胆酸的洗

脱液A;40%甲醇水溶液、45%甲醇水溶液洗脱得到含有牛磺熊去氧胆酸的洗脱液B。将洗脱液A和洗脱液B分别浓缩干燥得到牛磺胆酸22.08g,含量98.2%,收率93.15%,牛磺鹅去氧胆酸35.05g,含量98.5%;收率95.38%。

参考文献

[1]张利生,李雨静,张君祎. 牛磺鹅去氧胆酸在制备抗肝纤维化药物中的应用[P]. 湖北省:CN117180284A,2023-12-08.

[2]赵士敏,王芬,许岗等. 一种从家禽胆汁中制备牛磺鹅去氧胆酸和牛磺胆酸的方法[P]. 湖南省:CN115340587A,2022-11-15.

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