背景技术
假尿苷全称为假尿嘧啶核苷，是一种存在于tRNA中的稀有核苷酸，它的核糖与嘧啶环的C5连接，而不是和尿嘧啶N1连接，是一种尿嘧啶核苷的天然结构类似物。在生物体内，RNA上的尿苷通过假尿苷合成酶将核糖与碱基之间的C‑N键裂解并重新连接成C‑C键，异构形成假尿苷。
假尿苷作为一种RNA代谢产物，仅能从肾脏进行排泄，检测其含量可以作为胃癌、肿瘤等恶性疾病的诊断依据，且痛风、银屑病患者尿液中的假尿苷水平明显升高。假尿苷亦可作为制作mRNA新冠疫苗的关键部分，由于其结构特异性，将其加入到人工合成的mRNA中，不仅能让合成的mRNA免受免疫系统的攻击，还能提高分子稳定性和蛋白质产量，显著增加了mRNA表达蛋白的能力。故而科研人员将假尿苷及其类似物替换尿苷加入mRNA中，降低mRNA疫苗的免疫排斥反应，降低其被免疫系统识别而被清除的可能[1]。
现目前在假尿苷制备方面，只有传统的化学合成法可催化合成假尿苷，但是针对假尿苷的化学合成，存在化学合成步骤长、收率低，且用到的试剂易燃易爆，较不安全等一系列的问题。在生物合成方面，通过制备的微生物菌种发酵法制备假尿苷则存在生产周期长，产率低等问题。为了克服这些缺点，开发出更加安全有效的假尿苷合成方法成为科学界研究的焦点[2]。
合成方法
1、在100毫升单口烧瓶内，氮气保护条件下加入D‑核糖1.36g和DMF 20ml，高速搅拌同时体系温度降到‑20℃，滴加乙酰溴4.4g，搅拌12小时，反应结束后用二氯甲烷100ml进行萃取，得到的有机相加入MgSO4干燥，过滤母液减压蒸馏，并通过硅胶薄层分离得到化合物I，收率71％。
2、在100毫升单口烧瓶内，氮气保护条件下加入尿嘧啶2.35g和DMF 15g，降低体系温度到0℃，分批加入60％NaH 6.5g，高速搅拌同时分批加入(Boc)2O 10.1g，反应在室温下过夜，点板确认反应结束后，用二氯甲烷100ml进行萃取，得到的有机相加入MgSO4干燥，过滤母液减压蒸馏，并通过硅胶薄层分离得到3.96g化合物II，收率88％。
3、在100毫升单口烧瓶内，氮气保护条件下投入化合物II 1.26g和DMF 50g，高速搅拌同时体系温度降到0℃，分批加入60％的氢化钠4.0g，30分钟搅拌后加入化合物I 1.50g，室温搅拌12小时，用盐酸调节PH值为4‑5之间，并用二氯甲烷100ml进行萃取，得到的有机相加入MgSO4干燥，过滤母液减压蒸馏，并通过硅胶薄层分离得到1.33g化合物III，收率64％。
4、100毫升单口烧瓶内加入化合物III 1 .10g降温到0℃后滴加三氟乙酸20ml，室温反应4小时，待反应完毕后，蒸馏出三氟乙酸，加入乙酸乙酯20毫升重结晶，过滤母液，同时用丙酮10毫升搅拌30分钟后过滤干燥得到0 .8g化合物IV ,收率40％。
5、100毫升单口烧瓶内加入化合物IV 1.50g，甲苯20ml，水15毫升，四丁基溴化胺0.1克，室温下搅拌30分钟后，滴加乙酸酐0.32g后，加入novozyme435 0.15克，温度升至40‑45℃反应72h，待反应完毕后，温度降至室温，过滤母液，减压旋干母液，同时用丙酮10毫升重结晶2次，过滤干燥得到化合物V 0.86克，收率48％。
6、100毫升单口烧瓶内加入化合物V 1g，甲醇10ml，加入碳酸钠0.2g室温下搅拌4小时，待反应完毕后，过滤母液，干燥得到0.8g化合物VI假尿苷，收率85％[2]。
参考文献
[1]江苏海洋大学,连云港博凯莱特生物科技有限公司. 一种生物催化合成假尿苷的方法:CN202211285283.X[P]. 2023-04-04.
[2]武汉糖智药业有限公司. 一种化学酶法合成假尿苷的方法:CN202111581013.9[P]. 2022-03-18.