背景[1-3]
CLASPIN抗体是一种免疫球蛋白，它与细胞分裂过程中的染色体分离有关。CLASPIN抗体的检测可以用于诊断某些疾病，如慢性淋巴细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤等。
CLASPIN抗体是针对CLASPIN蛋白的特异性抗体。CLASPIN是一种染色质结合蛋白，它在细胞周期中起到重要的调节作用。其表达受到细胞周期的调控，并且在S/G2期达到顶峰。在没有DNA损伤的情况下，CLASPIN会与PNCA复合体发生相互作用。在检查点激活后，它与染色质保持结合，但会从PCNA复合体中释放，并以依赖于ATR的方式被磷酸化。磷酸化的CLASPIN会与数个DNA损伤应答成分发生相互作用，如BRCA1和Chk1，进而在这些蛋白质上发生依赖于ATR的磷酸化。
CLASPIN抗体
在正常情况下，CLASPIN抗体的水平很低，但在某些疾病中，其水平会升高。例如，在慢性淋巴细胞白血病中，CLASPIN抗体的水平通常会升高，这可能与癌细胞的增殖和分裂有关。因此，检测CLASPIN抗体可以帮助医生诊断这种疾病。
此外，CLASPIN抗体的检测还可以用于监测治疗效果。例如，在治疗慢性淋巴细胞白血病的过程中，如果CLASPIN抗体的水平下降，这可能表明治疗有效。反之，如果其水平没有下降或继续升高，则可能需要调整治疗方案。
CLASPIN在细胞中的功能复杂且多样，它在维持基因组的稳定性以及DNA损伤应答中扮演关键角色。因此，针对CLASPIN的抗体在科研领域中具有广泛的应用，可用于研究CLASPIN的表达、定位以及与其他蛋白质的相互作用等。
应用[4][5]
CLASPIN抗体可以用于LncRNA DLEU1对肝癌的抑制作用及汉黄芩素干预的机制研究
lncRNA DLEU1(Deleted in lymphocytic leukaemia 1)在多种肿瘤(包括膀胱癌、宫颈癌、胰腺癌、大肠癌以及卵巢癌等)中异常表达,且与多种肿瘤的不良预后相关,在肿瘤的发生、发展过程中起重要调控作用,但是DLEU1在肝癌的发生和发展进程中的作用方式及其分子机制尚需要进一步研究。
采用凋亡蛋白CLASPIN抗体检测芯片筛选汉黄芩素对肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3中凋亡相关蛋白的影响;通过在肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3中转染特异性靶向Claspin的siRNA后,通过流式细胞术检测Claspin干扰表达对肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的细胞周期进程和细胞凋亡的影响;采用建立腺病毒介导的YAP过表达以及TAZ过表达的SMMC7721细胞和HCCLM3细胞模型,通过流式细胞术和CLASPIN抗体的Western blot实验检测汉黄芩素能否通过Hippo通路下调Claspin表达来诱导肝癌细胞周期阻滞和细胞凋亡。此外,通过RNA dotblot和免疫荧光实验初步研究了汉黄芩素对SMMC7721和HCCLM3细胞中RNA m6A修饰的影响。
结果:CCK-8实验检测结果显示,汉黄芩素以剂量依赖的方式抑制肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的细胞活力;细胞周期及细胞凋亡检测结果显示,汉黄芩素可以促进肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的G2/M期阻滞并诱导肝癌细胞凋亡。RNA-seq检测结果显示,汉黄芩素处理后的SMMC7721细胞中差异表达基因中有1578个上调、2432个下调;KEGG分析显示,汉黄芩素诱导的差异表达基因在Hippo信号通路富集明显;RT-qPCR验证结果显示,汉黄芩素可以下调肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3中CTGF、CYR61和Claspin,上调细胞中p21。Western blot及CLASPIN抗体免疫荧光染色结果显示,汉黄芩素可降低肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的细胞核中YAP/TAZ分布,并增加YAP/TAZ在细胞质中的分布;同时Western blot结果显示,汉黄芩素可上调肝癌细胞中p-YAP、p-TAZ、pLATS1和pMOB1。
CLASPIN抗体抗体检测芯片筛选出汉黄芩素处理后的肝癌细胞中Claspin明显下调;细胞周期和细胞凋亡检测结果显示,Claspin干扰表达可促进肝癌细胞SMMC7721和HCCLM3的G2/M期阻滞并诱导肝癌细胞凋亡;而YAP过表达或TAZ过表达均可以部分逆转汉黄芩素诱导的SMMC7721细胞和HCCLM3细胞的细胞周期阻滞和细胞凋亡;Western blot实验结果进一步证明,YAP过表达或TAZ过表达均可部分逆转汉黄芩素对SMMC7721细胞和HCCLM3细胞中Claspin蛋白的抑制作用。此外,RNA dot blot和免疫荧光实验结果表明,汉黄芩素可以下调SMMC7721和HCCLM3细胞的RNA m6A修饰水平。结论:汉黄芩素可能通过激活MOB1-LATS1信号抑制肝癌细胞中YAP和TAZ的活性,下调Claspin的表达,从而诱导肝癌细胞的细胞周期阻滞和细胞凋亡。
参考文献
[1]The cancer-testis lncRNA lnc-CTHCC promotes hepatocellular carcinogenesis by binding hnRNP K and activating YAP1 transcription.[J].Xia Anliang;Yuan Wenwen;Wang Qiang;Xu Jianbo;Gu Yayun;Zhang Liansheng;Chen Chen;Wang Zhangding;Wu Di;He Qifeng;Yu Weiwei;Wang Fei;Xue Cailin;Zhang Yan;Bao Guojian;Tao Xuewen;Liu Siyuan;Wang Shouyu;Hu Zhibin;Sun Beicheng.Nature cancer,2022
[2]Wogonin Induces Cell Cycle Arrest and Apoptosis of Hepatocellular Carcinoma Cells by Activating Hippo Signaling[J].Fanglin Lu;Jie Yang;Jing Zeng;Keyan Wu;Man Teng;Wei Zhou;Weigan Shen;Xinnong Liu;Yanbing Ding;Yang Zhou;Yu Zhang.Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry,2022
[3]The Hippo Signaling Pathway in Cancer:A Cell Cycle Perspective[J].Xiao Yi;Dong Jixin.Cancers,2021
[4]N6-methyladenosine RNA modification and its interaction with regulatory non-coding RNAs in colorectal cancer.[J].Ge Yiling;Liu Tong;Wang Chuntao;Zhang Yanqiu;Xu Siyi;Ren Yiyi;Feng Yanlu;Yin Lihong;Pu Yuepu;Liang Geyu.RNA biology,2021
[5]吴克艳.LncRNA DLEU1对肝癌的抑制作用及汉黄芩素干预的机制研究[D].扬州大学,2023.